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    m7G RNA甲基化測序
    m7G全轉錄組測序

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    技術簡介
    m7G RNA甲基化是在甲基化轉移酶的作用下,使RNA鳥嘌呤(G)的第七位N上加上甲基的一種修飾( N7-methylguanosine,m7G)。研究表明,m7G RNA甲基化修飾存在于各類分子中,包括:mRNA 5’帽子結構、mRNA內部、pri-miRNA、轉運RNA(tRNA)和核糖體RNA(rRNA)。m7G RNA甲基化修飾能夠調節mRNA的轉錄、miRNA的生物合成和生物學功能、tRNA穩定性、18S rRNA的核內加工及成熟。m7G RNA甲基化修飾作為一類新型RNA甲基化,近兩年高影響因子文章不斷,是繼m6A修飾之后的又一表觀轉錄組學熱點。
    云序生物提供兩種m7G RNA甲基化測序服務:(1)m7G RNA甲基化單堿基測序,可對m7G修飾進行高通量檢測和單堿基定位;(2)MeRIP測序,可通過m7G特異性抗體,抓取有甲基化修飾的片段進行測序,對m7G修飾進行高通量測序和peak峰定位。此外,云序生物針對m7G RNA甲基化開發了多款產品,可實現對mRNA、LncRNA、pri-miRNA、tRNA和rRNA等多類RNA分子的m7G甲基化修飾水平的全 面檢測。

    云序優勢 
    單堿基分辨

    m7G RNA甲基化單堿基測序方式,可對m7G甲基化修飾進行單堿基定位。

    抗體富集效率高
    m7G MeRIP測序方式,采用預驗證的商業化抗體和精心優化的實驗流程,具有極高的效率和特異性。

    高通量檢測
    可對全轉錄組范圍內的m7G位點進行高通量地平行檢測。
    全分子覆蓋
    可全 面地對環狀RNA、mRNA、lncRNA、pri-miRNA、tRNA和rRNA等多類RNA分子的m7G位點進行檢測。
    一站式服務
    客戶僅需提供組織或細胞,云序生物一站式完成RNA抽提,樣品預處理,建庫,測序,數據分析全套流程。
    專業的生物信息學分析
    專業的生物信息學團隊,能夠滿足客戶的各類深入數據分析需求

    案例分析
    案例1:哺乳動物mRNA內m7G甲基化轉錄組圖譜
    原文:Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA 
    期刊:Molecular Cell 影響因子:14.25 
    由于全部種類的反轉錄酶均無法將RNA m7G位點逆轉錄成對應發生堿基突變的cDNA,為了準確的探究RNA內m7G甲基化情況,何川團隊利用m7G自帶正電荷的特征,開發了新的m7G單堿基深度測序方法。該方法能夠將RNA內含m7G位點轉化為另一種可產生反轉錄堿基變異的新位點,并依據堿基變異率估計m7G位點的甲基化水平。此方法隨后也被證實可檢測18S rRNA中的1639位內含m7G位點以及可揭示人類細胞tRNA中的22個46位內含m7G位點。并觀測到其在mRNA分布、富集的共有序列及其它統計特征與m7G-MeRIP-seq數據基本保持一致。該文章不僅揭示了m7G甲基化在人類細胞中的分布特征,同時還發現METTL1是一種甲基轉移酶,它在mRNA中催化了m7G甲基化修飾,并表明m7G的內部甲基化可以影響mRNA的翻譯。

    (A) Hela和HepG2細胞進行m7G單堿基深度測序:10個代表性的mRNA內m7G修飾結果展示。(C) 801個m7G位點的mRNA特征。(E)前7個mRNA內 m7G motif在mRNA中的分布百分比。

    (A) Hela和HepG2細胞進行m7G單堿基深度測序:10個代表性的mRNA內m7G修飾結果展示。(C) 801個m7G位點的mRNA特征。(E)前7個mRNA內 m7G motif在mRNA中的分布百分比。


    (A) Hela和HepG2細胞進行m7G單堿基深度測序:10個代 表性的mRNA內m7G修飾結果展示。(C) 801個m7G位點的mRNA特征。(E)前7個mRNA內 m7G motif在mRNA中的分布百分比。

    案例2:METTL1通過m7G甲基化促進let-7 MicroRNA的加工
    原文:METTL1 Promotes let-7 MicroRNA Processing via m7G Methylation
    期刊:Molecular Cell 影響因子:14.25 
    劍橋大學戈登研究所和病理學系中心,借助m7G RNA甲基化測序技術,識別了A549細胞中miRNA具有m7G甲基化修飾。該研究發現Mettl1調控的pri-let7 m7G修飾通過改變pri-let7中G-四重結構,進一步調控pre-let7和let7的表達,影響肺ai細胞遷移。該研究揭示了Mettl1依賴的m7G甲基化修飾可以作為調控miRNA結構、生物發生和細胞遷移的一種新的RNA修飾。
    m7G在miRNA生物發生中的作用
    圖注:m7G在miRNA生物發生中的作用
    樣本要求
    樣品類型 
    細胞、組織或RNA,其他樣本類型請電詢。 

    測序樣品量

    1.單堿基測序方式:
        a) 細胞:≥1×108 
        b) 組織:500 mg - 5 g 
        c) RNA:100 μg - 300 μg 
    2. MeRIP測序方式:
        a) 細胞:≥2×107
        b) 組織:100mg - 1g
        c) RNA:30 μg - 300 μg 
        d) 超微量滿足500 ng - 30 μg

    樣品運輸及保存
    樣品運輸:樣品置于1.5mL離心管中,封口膜封好,干冰運輸。 
    樣品保存:細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理,液氮凍存后-80℃保存;RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中,-80℃保存,避免反復凍融。

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